透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室zui簡(jiǎn)便zui常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過(guò)程中，除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。那無(wú)菌透析袋是怎樣使用的呢？

　　1 透析的原理

　　透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱(chēng)為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱(chēng)為“滲出液”或“透析液”。

　　透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。

　　2 無(wú)菌透析袋的材質(zhì)與規(guī)格

　　透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等，但用的zui多的還是用纖維素（再生纖維素 RC、纖維素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)公司（spectrum）和美國(guó)聯(lián)合碳化物公司（union carbide）生產(chǎn)的各種尺寸的透析管。截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量，縮寫(xiě)為MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類(lèi)，單位為道爾頓（D）。截留分子量越大也就是說(shuō)透過(guò)性越大，一般而言，透析袋截留分子量越小價(jià)格越貴，因?yàn)榻亓舻姆肿釉叫∫笸肝龃矫埽瑑r(jià)格越貴。商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為8mm-77mm不等。

　　半透膜制成的透析袋作為工具，存在透析時(shí)間長(zhǎng)、樣品回收率不高、無(wú)法處理微量樣品的難題。目前已有專(zhuān)為10到100ul的微量樣品透析而設(shè)計(jì)的透析工具。把樣品加在平底的透析管（類(lèi)似小量提質(zhì)粒的離心純化柱，可以插入1.5ml的離心管中，管底是半透膜）中，再插入特制的浮板（浮漂）中，置于緩沖液面10min即完成透析。實(shí)驗(yàn)表明，100ul pH2.8的IgG洗脫液在1L pH9.4的緩沖液中只需不到10min即可平衡到pH9.4。如果在裝緩沖液的燒杯底加磁力棒攪拌則更能加速透析速度。這種方法有較高的回收率，能夠節(jié)約珍貴的樣品，并能節(jié)約時(shí)間，特別適合摸條件的預(yù)實(shí)驗(yàn)。

　　透析袋的標(biāo)識(shí)：

　　27mm（MD34）透析袋（MW：3500）

　　27mm是指透析袋干燥時(shí)的直徑。

　　MD34mm是指透析袋干燥時(shí)壓平的寬度。

　　MW：3500是指無(wú)菌透析袋的截留分子量。